簡要描述:產(chǎn)品名稱: Stemcell Lymphoprep 淋巴細(xì)胞分離液產(chǎn)品貨號(hào): 07851產(chǎn)品規(guī)格:500 ml產(chǎn)品品牌:Stemcell
產(chǎn)品目錄
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品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品名稱: Stemcell Lymphoprep 淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品貨號(hào): 07851
產(chǎn)品規(guī)格:500 ml
產(chǎn)品品牌:Stemcell
產(chǎn)品簡介:
Lymphoprep是一種無菌、內(nèi)毒素含量低的即用型分離液,是目前國內(nèi)外分離正常人或病人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC:Mononuclear cells of Peripheral blood)(包括單核細(xì)胞monocytes和淋巴細(xì)胞lymphocytes)的常用方法,具有與昂貴的GE公司的PLUS或PREMIUM分離液同樣的指標(biāo)。
產(chǎn)品應(yīng)用
人外周血、骨髓和臍帶血淋巴細(xì)胞分離
骨髓、胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離
產(chǎn)品參數(shù):
成分:泛影葡胺鈉(Sodium diatrizoate):9.1% (w/v);多糖:5.7% (w/v)
密度:1.077±0.001g/ml
滲透性:290±15mOsm
內(nèi)毒素含量:<1.0EU/ml
分離所得PBMC中紅細(xì)胞的含量:整個(gè)細(xì)胞數(shù)目的3-10%。
產(chǎn)品原理
PBMC與血液中的其他成分存在密度差異,利用密度在1.077±0.001g/ml之間而且近于等滲的LymphoprepTM溶液作密度梯度離心時(shí),紅細(xì)胞和粒細(xì)胞由于密度大,故沉于分離液底部。PBMC密度稍低于分離液,故位于分離液界面上,獲得PBMC。LymphoprepTM分離液含有多糖(polysacccharide),多糖能粘附在細(xì)胞表面,使紅細(xì)胞和粒細(xì)胞聚集下沉,但它對淋巴細(xì)胞的活性和紅細(xì)胞和粒細(xì)胞進(jìn)一步分離有負(fù)面影響。
注意事項(xiàng):
該分離液僅適用于人體的外周血液,不適用于動(dòng)物。
使用該分離液時(shí),需將待分離的血液用生理鹽水做等體積的稀釋。
分離液的保存應(yīng)置于無菌環(huán)境,并避光保存。
詳細(xì)操作步驟見產(chǎn)品說明書。
操作步驟(僅供參考)
第一步、
在含有抗凝劑(EDTA、heparin、或ACD)的管子內(nèi)收集血液,或者用去纖維蛋白的血液。此處抗凝劑的選擇取決于得到淋巴細(xì)胞以后,后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求,一般選取EDTA即可。
第二步、
用等體積的0.9%的NaCl溶液(即生理鹽水)稀釋血液。
第三步、
在12-15ml的離心管內(nèi),將6ml稀釋后的血液鋪在3ml分離介質(zhì)Lymphoprep上。
此處鋪層可以采用從上面鋪,或從下面鋪兩種方法。鋪層的關(guān)鍵是不能讓血液和分離液混在一起,要界面分層清晰。
第四步、
在室溫下——20攝氏度左右,用水平轉(zhuǎn)子,800g的離心力,離心20分鐘。(如果血液存放時(shí)間超過2小時(shí)——從人體抽出算起,離心時(shí)間延長為30分鐘)。
第五步、
離心后,離心管內(nèi)位于血液和分離液界面處的明顯的一層即為淋巴細(xì)胞層。
用移液管直接吸取淋巴細(xì)胞層,注意,不要去除上面的血液層,而是直接吸取。移至另一離心管中。
第六步、
用大約2倍體積的0.9%的NaCl溶液(生理鹽水)稀釋收集到的淋巴細(xì)胞,在250g-300g的離心力下,離心10分鐘,(此處在加上稀釋液后的體積在15ml離心管內(nèi)不宜超過5-6ml,體積過大,會(huì)降低淋巴細(xì)胞的產(chǎn)率),收集沉淀,即得到所需的人外周血單個(gè)核細(xì)胞,即可用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱: Stemcell Lymphoprep 淋巴細(xì)胞分離液
產(chǎn)品貨號(hào): 07851
相關(guān)定義:
Ficoll密度梯度離心
常用來分離人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的分層液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F/H)分層液。Ficoll是蔗糖的多聚體,呈中性,平均分子量為400,000,當(dāng)密度為1.2g/ml仍未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重,離心后漂浮于分層液的液面上,也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞,就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。
單個(gè)核細(xì)胞
外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞,包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
這是一個(gè)含義不明確的術(shù)語,常用于指組織切片或血液白細(xì)胞組分中的單個(gè)核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)或淋巴細(xì)胞或兩者的混合物,是相對于多形核細(xì)胞而言的。
血細(xì)胞和密度
利用細(xì)胞的比重不同,可把血細(xì)胞分成不同的比重層次,外周血中紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞比重較大,為1.092左右,而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞比重較小,為1.075~1.090。配制比重介于1.075~1.090之間的等滲液,通常用聚蔗糖(商品名Ficoll)與泛影葡胺,用此比重的等滲液作密度梯度離心,使比重大于此比重的紅細(xì)胞、多形核粒細(xì)胞沉于管底,淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浮于分層液與血液界面上,可用吸管吸出。這種方法分離出的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞稱為單個(gè)核細(xì)胞。在干細(xì)胞采聚過程中,外周血或骨髓中的造血干細(xì)胞比重亦與淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞相同。因而,分離的單個(gè)核細(xì)胞中含有造血干細(xì)胞。
血液中的細(xì)胞成分。根據(jù)細(xì)胞質(zhì)中有無血紅蛋白,血細(xì)胞被分為紅細(xì)胞和白細(xì)胞。白細(xì)胞根據(jù)其胞質(zhì)中有無顆粒又分為有粒白細(xì)胞和無粒白細(xì)胞。有粒白細(xì)胞又根據(jù)其顆粒的染色特性分為嗜酸粒細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。無粒白細(xì)胞又根據(jù)其大小、核質(zhì)比例和染色性質(zhì)分為單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。